Sí. Y si alguien del laboratorio de Stephen Tapscott está leyendo esto, tome nota.
Dux4 antagoniza la expresión de beta-tubulina en los precursores musculares.
Vamos a desglosar esto.
Dux4 es un factor de transcripción que se considera un genógeno, un gen que una vez jugó un papel biológico importante en nuestro linaje, pero ya no lo hace. Creemos esto porque no muestra expresión a nivel de proteína en ningún tejido humano normal, y solo es detectable minuciosamente a nivel de ARN en un puñado de tejidos. Normalmente, Dux4 está unido a una pila de cromatina restrictiva, lo que impide su expresión, pero ciertas anomalías genéticas dan lugar a una expresión incorrecta de este gen en las células musculares, lo que conduce a la distrofia muscular fascioescapulohumeral (FSHD), que se caracteriza por un desgaste progresivo del cuello. Músculos del hombro, parte superior del brazo y tobillo.
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Cuando comencé a trabajar en mi Master, buscaba un nuevo tratamiento basado en microRNA para FSHD al apuntar a la expresión anormal de Dux4 (el tratamiento no funcionó, pero esa es otra historia). Como una prueba de concepto inicial para nuestra estrategia de tratamiento, me encargaron probar la respuesta de la traducción de Dux4 a nuestro tratamiento en las células musculares.
Los resultados fueron … extraños.
Esta es una transferencia Western de Dux4 en células musculares tratadas / no tratadas. Para aquellos de ustedes que no están familiarizados con esta técnica, es un método para visualizar los niveles de una proteína específica. Para poder comparar columnas de un western, también debe visualizar la expresión de un “gen de mantenimiento” (una proteína cuyos niveles no cambian mucho) para que las diferencias entre columnas se puedan atribuir a diferencias reales en la expresión. , no solo las diferencias en el contenido total de proteínas. Usé la beta tubulina como control endógeno, ya que sus niveles son relativamente estables en el linaje muscular.
Óptimamente, un control endógeno debe ser idéntico entre las columnas de un western. Los míos claramente no lo eran.
Desde que era nuevo en el laboratorio, mi supervisor decidió que simplemente no había cargado los carriles correctamente y me dijo que repitiera el experimento. Yo si; varias veces. Mismo resultado
Luego, por un capricho, decidí volver a probar mi western con un gen de mantenimiento diferente , solo para asegurarme de que los niveles fueran correctos. Esto es lo que tengo:
Expresión agradable, estable en todos los ámbitos. Claramente, la alteración en los niveles de tubulina no fue artefactual.
Míralo. Tómelo. Vea dónde Dux4 es más alto y vea dónde está más baja la tubulina. Solo de vista, la respuesta es clara: Dux4 reduce los niveles de tubulina.
En un intento por mostrar una relación causal, seguí adelante y corrí una regresión simple de tubulina contra Dux4:
(Todos los puntos de datos de dos experimentos combinados)
Como puede ver, hubo una relación inversa exponencial casi perfecta entre Dux4 y Tubulin, lo que llevó a la única conclusión razonable: Dux4 antagoniza la expresión de beta-tubulina en células precursoras de músculo.
Como esta observación no estaba directamente relacionada con nuestra estrategia de tratamiento, mi supervisor decidió matar el proyecto en lugar de investigar el significado de estos hallazgos. Así es la vida.
Así que sí. No estamos planeando publicar esto, y no he estado al día con la literatura sobre FSHD, pero si planea estudiar Dux4 en cualquier contexto, recomiendo tener en cuenta esta relación. No utilice tubulina como control endógeno. Y hey! Quizás esta relación resulte ser biológicamente significativa en la patología de la FSHD. Si es así, lo escuchaste aquí primero.
Se da una palmadita en la espalda.